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ELISA实验之细胞冻存的方法


酶免官方商城 / 2021-01-29

细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中,及时冻存原始细胞是十分重要的。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候,细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败,所以在实验过程中细胞冻存是十分重要的步骤,接下来就向大家介绍一下细胞冻存的方法。

1、冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。

2、配制冷冻保存溶液使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚砜DMSO20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。

3、离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液0.1ml计数细胞浓度及冻前存活率。

4、取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液DMSO后浓度为5~10%,使细胞浓度为1~5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期然后进行冻存。

稳定的细胞是能够顺利进行实验的前提,所以大家一定要重视这个问题,及时将细胞进行冻存。

 


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